產(chǎn)  品  信  息

產(chǎn)品名稱 ：  大腸菌群平板計數(shù)成套試劑

貨   號： SP002

單   位： 套；1套產(chǎn)品檢測1個批次的5個樣品。

包   裝： 10套/箱

每套產(chǎn)品組成：

●大腸菌群平板計數(shù)集成平板組1組   ● VRBA培養(yǎng)基（300mL/瓶）1瓶   ●10管組BGLB肉湯管1只

1、大腸菌群平板計數(shù)集成平板組：每一組由5塊集成平板組成，每塊集成平板含4個方形平皿；1塊平板檢測一個樣品，5塊平板共檢測一個批次的5個樣品。自上而下依次編號為1、2、3、4、5，代表該批次5個樣品的編號，每一個樣品使用一塊集成平板，做兩個連續(xù)稀釋度，每個稀釋度兩個平皿；使用前，將該樣品的批次編號標注在集成平板組的標簽區(qū)域內(nèi)，使用時依次自上而下取用集成平板，左手揭開集成平板蓋，右手持無菌吸管將樣品稀釋液加入平皿內(nèi)，每加完一個樣品后蓋上集成平板蓋，依次自下而上疊加；當加完一個批次的5個樣品后，傾注平板計數(shù)培養(yǎng)基；傾注時依次從上而下拿取已經(jīng)加好樣品的集成平板，每傾注好一塊集成平板，立即在實驗臺上前后左右平移混勻，然后自下而上疊加，待瓊脂凝固后以一組為單位翻轉(zhuǎn)過來。

2、VRBA培養(yǎng)基（300mL/瓶）：使用前經(jīng)水浴加熱液化并恒溫至48℃?zhèn)溆?；每瓶總量?00mL，為1組共5塊集成平板的使用量，每個平皿約15mL。

3、10管組BGLB肉湯管：用于證實試驗。使用時，左手揭開管蓋，右手持專用開孔器，經(jīng)火焰消毒并冷卻（或用酒精消毒），在組合管的封膜上連續(xù)開孔；用接種環(huán)選取1組5個平板上的10個將典型和可疑菌落接種到管內(nèi)，1管接種1個菌落；經(jīng)培養(yǎng)后，產(chǎn)氣窗內(nèi)觀察產(chǎn)氣情況；產(chǎn)氣窗內(nèi)有氣泡產(chǎn)生者證實為大腸菌群陽性。

                                                                使 用 方 法

  1   1.液化培養(yǎng)基：取1瓶VRBA培養(yǎng)基水浴液加熱化后恒溫至48℃?zhèn)溆?/span>

  2   2.樣品處理：

2.1.固體樣品和半固體樣品取25g于盛有225mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)經(jīng)均質(zhì)處理制成1:10的樣品勻液，再用樣品稀釋管做成1：100和1:1000的或更高稀釋度的連續(xù)稀釋度的樣品勻液。

2.2.液體樣品吸取25mL樣品置于有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶或其他無菌容器中充分振搖,制成1∶10的樣品勻液；再用樣品稀釋管做成1：100和1:1000的或更高稀釋度的連續(xù)稀釋度的樣品勻液。

3.加樣：用移液器吸取兩個連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液加入集成平板內(nèi)，一個稀釋度兩個平板，每個平板1mL。注：包裝飲用水采用原液和1:10兩個稀釋度檢驗。

     4. 傾注平板并培養(yǎng)：將液化并恒溫至48℃的VRBA培養(yǎng)基傾注集成平板;每個平板約15ml，然后在操作臺上將平板前后或左右移動，使培養(yǎng)基和樣品充分混勻，待培養(yǎng)基凝固后翻轉(zhuǎn)集成平板板置于 36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h～24h。

    5. 菌落數(shù)選擇：選取菌落數(shù)在 15CFU～150CFU 之間的平皿,計數(shù)平皿上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落，最低稀釋度平板低于15CFU 的記錄具體菌落數(shù)。

       6. 證實試驗：從1組5個集成平板中選取10個不同類型的典型和可疑菌落（不足10個菌落，全部選?。┮来谓臃N于10管組BGLB肉湯管中，每管接種1個菌落。置于培養(yǎng)箱內(nèi) 36℃±1℃ 培養(yǎng) 24h～48h后觀察產(chǎn)氣情況。凡產(chǎn)氣窗內(nèi)有氣泡者為陽性管。

      7. 結(jié)果報告：經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的管數(shù)比例（該比例數(shù)適用于該批次5個樣品的平板上的菌落數(shù)計算）乘以上述“5.菌落數(shù)選擇”中計數(shù)的平板菌落數(shù),再乘以稀釋倍數(shù),即為每 g(mL)樣品中大腸菌群數(shù)。例:10^-3樣品稀釋液1mL,在 VRBA 平板上有100個典型和可疑菌落,挑取其中10個接種BGLB肉湯管,證實有6個陽性管,則該樣品的大腸菌群數(shù)為:100×6/10×10³/g(mL)= 6.0×10⁴CFU/g(mL)。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀 釋倍數(shù)計算。